Gra opowiada o braciach, którzy zostali wysłani, by uratować księżniczkę i przywrócić pokój w królestwie. Musi przedostać się przez ląd, pod ziemię i przez morze, w ośmiu światach podzielonych na cztery poziomy każdy. Podczas swojej podróży napotykają różnych wrogów, w tym Goombas, Koopa Troopas i Bullet Bills, których można pokonać, skacząc bezpośrednio na nich. Na końcu każdego świata bracia stają twarzą w twarz z Bowserem, którego trzeba powstrzymać, zanim misja będzie mogła być kontynuowana.
Wzmocnienia odgrywają integralną rolę w grze Bros Original Adventure 1985. Kiedy Bros skacze i uderza w blok ze znakiem zapytania od spodu, ujawnia się przedmiot. Może to być moneta, grzyb, ognisty kwiat lub gwiazda. Grzyb jest najważniejszym przedmiotem w grze, sprawia, że Bros rośnie ponad dwukrotnie w stosunku do normalnego rozmiaru i siły, co daje mu możliwość łamania cegieł swoim uderzeniem z wyskoku. Pozwala również na jedno trafienie bez utraty życia. Gdy Bros jest w tym „super” stanie, może zebrać ognisty kwiat, który pozwala mu strzelać ognistymi kulami. Gwiazdy zapewniają tymczasową niezwyciężoność, a 100 monet zapewnia dodatkowe życie.